Condiciones de PCR, reactivos, equipamiento y control de calidad, tal como se ejecutan en los dos laboratorios. Citables en la sección de materiales y métodos de tu publicación.
| Muestra | 20–100 ng / reacción |
|---|---|
| Secuenciador | ABI PRISM 3730xl (96 capilares) |
| Kit | BigDye® Terminator v3.1 (Applied Biosystems) |
| Purificación PCR | ExoSAP-IT™ Express (Thermo Fisher) |
| Termociclador | DNA Engine Tetrad 2 Peltier (BIO-RAD) |
| Análisis | Variant Reporter v2.1 · DNASTAR Lasergene SeqMan 7.0 |
| Extracción gDNA | InstaGene Matrix (BIO-RAD) / Exgene Tissue SV |
| Electroforesis | Agarosa 1,5% · 300 V · 200 A · 20 min |
| Paso | Temp. | Tiempo | Ciclos |
|---|---|---|---|
| Desnaturalización inicial | 95 °C | 5 min | 1× |
| Desnaturalización | 95 °C | 30 s | 35× |
| Anillamiento | 55 °C | 30 s | |
| Extensión | 72 °C | 1 min | |
| Extensión final | 72 °C | 7 min | 1× |
| Conservación | 4 °C | ∞ | — |
Cada lote de reactivos pasa control de calidad interno. Análisis BlastN incluido sin costo.
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