Servicio en paquete, desde la preparación hasta el análisis, para determinar la especie de microorganismos. Amplificación y secuenciación con primers universales de stock — sin coste adicional de primer — y análisis BlastN incluido.
Bacterias · 16S rRNA — PCR con 27F/1492R y secuenciación con inter-primers 785F/907R: más de 1.350 bp. Hongos — 18S rRNA >1.600 bp · región ITS >500 bp · 26S rRNA (D1/D2/D3) >1.300 bp.
PCR con primers universales 27F / 1492R. Identificación a género/especie por secuenciación capilar.
Primers de secuenciación: 785F/907R · 518F/800R · 27F/1492R · 337F/1100R
PCR y secuenciación con primers universales NS1 / NS8. Para hongos filamentosos, levaduras y mohos; identificación a género.
PCR y secuenciación con primers ITS1 / ITS4 (variantes ITS1–ITS5). Alta resolución; combina con BLAST UNITE/GenBank para identificación a especie.
PCR y secuenciación con primers LR0R / LR7. Complementa ITS para basidiomicetos y ascomicetos; alta resolución filogenética.
Flujo estandarizado para los cuatro servicios de identificación molecular. El mismo protocolo en Madrid y Santiago.
| 1 · Extracción de gDNA | Método de resina o ebullición con PrepMan™ (Thermo Fisher). Adecuado para colonias bacterianas, biofilms y muestras fúngicas. |
|---|---|
| 2 · Amplificación PCR | Bacterias: 16S rRNA (27F · 1492R) Hongos: ITS (ITS5 · ITS4) · 18S (NS1 · NS24) · 26S (LR0R · LR7) |
| 3 · Primers de secuenciación | Bacterias: 16S (785F · 907R) Hongos: ITS (ITS5 · ITS4) · 18S (NS1 · NS8) · 26S (LR0R · LR7) |
| 4 · Secuenciación | Forward y reverse por servicio · kit BigDye® Terminator v3.1 · ABI 3730xl |
| 5 · Resultado | Homología contra la base rRNA de NCBI · Standard BI-REPORT con cepas más similares · datos crudos en el portal |
Los primers usados están publicados en la tabla de primers universales.
| Axen™ H Taq PCR Master Mix (2X) | 10 µL |
|---|---|
| Primer F, R (10 pmol/µL) | 1 µL |
| Template (20 ng/µL) | 1–2 µL |
| Agua (grado HPLC) | 7 µL |
| Volumen total de reacción | 20 µL |
| Paso | Temp. | Tiempo | Ciclos |
|---|---|---|---|
| Desnaturalización inicial | 95 °C | 5 min | 1× |
| Desnaturalización | 95 °C | 0,5 min | 31× |
| Anillamiento | 57 °C | 0,5 min | |
| Extensión | 72 °C | 1,4 min | |
| Extensión final | 72 °C | 10 min | 1× |
Standard BI-REPORT entregado dentro del TAT (3–5 días hábiles tras recepción), listo para publicación científica o control de calidad interno:
| Primers | Universales de stock, sin coste adicional |
|---|---|
| Análisis | BlastN incluido sin cargo |
| TAT | 3–5 días hábiles desde recepción |
| Formato | Colonia, pellet o gDNA extraído |
| Guía relacionada | Tu primera orden 16S paso a paso → |
Especialista NGS / Sanger / Síntesis · respuesta en <24 h hábiles desde Madrid o Santiago
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